使用酶標(biāo)儀測(cè)定黃曲霉毒素，常采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法，以下是具體的操作步驟：

        樣品準(zhǔn)備：稱取一定量的食用油或其他含油食品樣品，用適當(dāng)?shù)奶崛∪軇ㄈ缂状?- 水混合溶液，常見(jiàn)比例為 7:3）進(jìn)行提取。將樣品充分振蕩、離心，使黃曲霉毒素溶解在提取液中。然后取一定量的上清液，根據(jù)需要進(jìn)行適當(dāng)稀釋，以確保后續(xù)檢測(cè)時(shí)樣品中黃曲霉毒素的濃度在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。

        試劑準(zhǔn)備：準(zhǔn)備黃曲霉毒素 ELISA 檢測(cè)試劑盒，該試劑盒通常包含包被有黃曲霉毒素抗原的微孔板、黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品（不同濃度梯度，如 0、5、10、20、50、100 ng/mL 等）、酶標(biāo)記物（一般是酶標(biāo)記的抗黃曲霉毒素抗體）、洗滌液、底物溶液和終止液等。

        加樣：在微孔板中加入不同濃度的黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)濃度設(shè)置至少 2 個(gè)平行孔，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的參考點(diǎn)。同時(shí)，加入適量的處理好的樣品溶液到相應(yīng)的孔中，同樣設(shè)置平行孔。另外，還需設(shè)置空白對(duì)照孔（通常加入等量的提取溶劑或稀釋液）和陰性對(duì)照孔（加入已知不含黃曲霉毒素的樣品提取液）。

        溫育反應(yīng)：將微孔板放入恒溫培養(yǎng)箱中，在適宜的溫度（如 37℃）下溫育一定時(shí)間（如 30 分鐘至 1 小時(shí)），使樣品中的黃曲霉毒素與包被在微孔板上的抗原充分競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限的抗體結(jié)合位點(diǎn)。

        洗滌：溫育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌微孔板，一般洗滌 3-5 次，每次浸泡 1-2 分鐘，以去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少非特異性吸附帶來(lái)的干擾。

        加酶標(biāo)記物：向每個(gè)孔中加入適量的酶標(biāo)記物，使酶標(biāo)記的抗黃曲霉毒素抗體與結(jié)合在微孔板上的黃曲霉毒素發(fā)生特異性結(jié)合。然后再次將微孔板放入恒溫培養(yǎng)箱中，在適宜溫度下溫育一定時(shí)間（如 30 分鐘左右）。

        洗滌：重復(fù)上述洗滌步驟，徹底洗去未結(jié)合的酶標(biāo)記物。

        加底物顯色：向每個(gè)孔中加入適量的底物溶液，酶標(biāo)記物中的酶會(huì)催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。在適宜溫度下避光反應(yīng)一定時(shí)間（如 15-30 分鐘），使顏色充分發(fā)展。

        終止反應(yīng)：加入終止液，終止酶促反應(yīng)，使顏色穩(wěn)定下來(lái)。此時(shí)，溶液的顏色深淺與樣品中黃曲霉毒素的含量呈負(fù)相關(guān)，即樣品中黃曲霉毒素含量越高，與包被抗原結(jié)合的抗體就越少，酶標(biāo)記物結(jié)合的量也越少，顯色反應(yīng)就越弱，顏色越淺。

        測(cè)定吸光度：將微孔板放入酶標(biāo)儀中，選擇合適的波長(zhǎng)（一般為 450 nm），測(cè)定每個(gè)孔的吸光度（OD 值）。

        繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算結(jié)果：以黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的平均 OD 值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品孔的平均 OD 值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得對(duì)應(yīng)的黃曲霉毒素濃度，再根據(jù)樣品的稀釋倍數(shù)和稱樣量，計(jì)算出樣品中黃曲霉毒素的實(shí)際含量。

        通過(guò)以上步驟，利用酶標(biāo)儀結(jié)合 ELISA 法可以準(zhǔn)確測(cè)定食品中黃曲霉毒素的含量。

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